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電子結腸鏡檢查前，需做好腸道準備，應規范飲用清腸藥物，保證排出清水或至少沒有明顯糞渣，才能表示已經將腸道洗干凈。因為如果未將腸道洗干凈，腸鏡進入腸腔后，可見糞便附著于結腸黏膜上，可能不容易進境，并且無法較好觀察結腸黏膜，導致疾病漏診。進入腸鏡檢查室后，患者應左側臥位于檢查床，在進鏡前應用潤滑油潤滑肛周，首先需進行直腸指診，然后再將腸鏡從肛門塞進腸腔內。通常腸鏡外側也會抹油起潤滑作用，以便更好進鏡。操作時醫生會右手持鏡，左手控制遙控方向，在腸鏡進入腸腔后推鏡，即可完整觀察直腸、乙狀結腸、降結腸、橫結腸以及升結腸，一直到回盲部，還可通過回盲瓣口進入小腸末端，退鏡時可再次仔細觀察整個結腸情況，從而完成整個結腸鏡檢查。