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男性支原體、衣原體的檢查優先建議以精液作為樣本，通常采用手淫的方法，此外精液檢查還可以化驗患者精子的濃度、活力、畸形率等，以及其他細菌的檢查，即患者可以留一次精液，進行多項檢查。支原體、衣原體的檢查理論上也可用前列腺液檢查，但前列腺液主要用于進行前列腺液常規的檢查，取材方法是通過醫生進行前列腺按摩后取出，但是前列腺液檢查存在一定誤差，而且因為部分患者無法耐受過程中的疼痛不適，因此臨床上建議優先選擇精液進行檢查。少數情況下可以通過尿液檢查支原體、衣原體，但通常較少推薦。因為一次排尿量較大，易造成支原體、衣原體相對濃度較低，檢查的準確性也會有所降低。